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本试剂盒适用于miRNA加poly(A)法合成cDNA，包含了miRNA 3'末端加Poly(A)反应所需的Poly(A)聚合酶(PAP)以及反转录反应所需的原料和引物，可保证在miRNA 3'末端加Poly(A)修饰和反转录同时进行。只需设计miRNA特异性正向引物，与试剂盒中的通用反向引物配合使用即可进行后续的qPCR实验。同时，本试剂盒提供了人、大鼠、小鼠通用U6内参正向/反向引物，可用于标准曲线绘制。

反转录产物cDNA可直接用于PCR或qPCR，与2×SYBR Green qPCR预混液(货号：M20040、M20041)配合使用即可进行高性能的基因表达分析。

• 灵敏度高：检测更灵敏，可对低至10pg RNA进行检测。
  
• 操作简便：poly(A)加尾和cDNA合成在同一反应体系中一步完成，简化操作。

• 使用前，将冻存的各组分充分融解并轻轻混匀后使用。
  
• 本制品在配制时需避免强光照射、反复冻融。
  
• 请使用RNase-free实验耗材，避免不必要的损失影响实验结果。
  
• 本制品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 反转录反应体系配制
  室温解冻miRNA RT Mix和2×miRNA RT Buffer并轻柔混匀，在RNase-free PCR管中，按下列组分配制RT反应液，反应液配制操作请在冰上进行。
  

  成分	用量
  miRNA RT Mix	1.75μL
  2×miRNA RT Buffer	5μL
  Total RNA	X μL
  RNase-Free H2O	至10μL

  • 建议总miRNA的范围为10pg～2μg，合成的miRNA拷贝数最低可达60 copies，RNA投入总体积不超过3.25μL。
• 反转录程序设置
  将上述配制的体系混合均匀后，置于PCR仪中进行反应，具体程序如下：
  

  温度	时间	备注
  37℃	50min	miRNA加尾及反转录
  85℃	5s	酶失活

• 产物收集
  反转录产物cDNA可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后置于-80℃，避免反复冻融。
  
  • 对于qPCR实验，为避免反转录体系对qPCR反应的抑制，可将反转录产物cDNA稀释10～1000倍使用。